大蒜油研究新突破：氣相色譜質譜聯用分析揭示其特殊成分！
測式條件的分析：
載氣：氦氣，41 cm/sec,45攝氏度測定
柱箱溫度：45攝氏度，保持3min,
45-240攝氏度,5攝氏度/min,
240攝氏度保持3min
進樣方式：熱柱上進樣，100攝氏度，
108ml/min分流出口流量
1.2ul二氯甲烷，再吸入含1.0mg/ml大蒜油樣品
的二氯甲烷溶液1.2ul進樣
檢測器：MSD，200攝氏度傳輸線，全掃描35-215amu
氣相色譜柱：DB-XLB
30m柱長x0.25mm內徑0.5um膜厚
部件號：122-1236
建議使用下列消耗品：
襯管： 單錐型，低壓，5183-4647
隔墊：綠色，5183-4759
密封墊：鑲金，18740-20885
注射器：5納升,23-26s/42/HP,錐型，固定式，5181-1273
GC5890N 全數字高效氣相色譜儀
GC5890N 全數字高效氣相色譜儀可選配多種檢測器及填充柱、分流 不分流毛細管柱進樣系統；全兼容安捷倫 6890N 氣相色譜儀檢測器及相關檢測器控制板、色譜工作站和自動進樣器。性價比卓越，性能優良，運行穩定可靠。
血栓性疾病包括動脈粥樣硬化、動脈血栓形成和深靜脈血栓形成，越來越多的患者受此類疾病的困擾。止血作為有效的生理防御機制能夠保證血液在循環中正常流動，而止血障礙會加速血栓的形成。除了血小板和凝血因子，凝血酶的激活和抑制在止血中也發揮了關鍵性作用。凝血酶是一種損傷處血管內皮細胞產生的多功能蛋白酶，它參與凝血過程中各個關鍵性環節，主要將纖維蛋白原轉化成纖維蛋白，并與后者交聯形成血栓。
目前，抗凝血研究通常圍繞內源性抗凝血途徑（活化時間凝血酶時間（APTT））、外源性抗凝血途徑（凝血酶原時間（PT））、共同抗凝血途徑（凝血酶時間（TT））以及降低纖維蛋白原（FIB）開展。
目前常用的抗凝血藥物可能會帶來出血等健康風險。因此，尋找安全有效的抗凝血成分一直是人們關注的焦點。最新的研究表明大蒜苗能夠通過改變APTT、PT、TT、FIB含量而發揮抗凝血作用，揭示了蔥屬抗凝血活性的潛能。
沈陽農業大學食品學院的周麗麗、朱艷雯、白 冰*等人從大蒜中分離提取大蒜油，通過紫外光譜、分子熒光光譜、動力學分析等探究大蒜油及其主要成分的抗凝血作用，旨在為大蒜油抗凝血功能的研究提供參考。
1、大蒜油氣相色譜質-譜聯用分析結果
如圖1所示，大蒜油分別在6.5、8.5、10.3 min處存在3 個色譜峰，經面積歸一化分析，總硫醚含量大于90%。定性分析可以看出，質荷比（m/z）41、73、114、146、178是主要碎片。m/z 114（M a ）、m/z 146（M b ）和m/z 178（M c ）分別為DAS（C 6 H 10 S，114.21）、DADS（C 6 H 10 S 2 ，146.26）和DATS（C 6 H 10 S 3 ，178.33）的分子離子碎片。m/z 41（對應CH 2 ＝CH-CH 2 -）和m/z 73（對應CH 2 ＝CH-CH 2 -S-）是以上3 種物質的共有碎片。
2、大蒜油、DAS、DADS、DATS對凝血酶活性的影響
如圖2所示，本研究利用大蒜油、DAS、DADS、DATS與凝血酶進行相互作用后檢測凝血酶活性的變化，不同濃度硫化物對凝血酶活性有部分抑制作用，且存在濃度依賴關系，濃度越高，活性抑制越強。進一步以DAS、DADS、DATS與凝血酶作用，1～5 mmol/L濃度范圍均對酶活性起到部分抑制效果，其中DATS作用最強，DADS次之，DAS最弱（圖2B～D）。
3、酶動力學分析結果
結果如圖3所示，經DAS、DADS、DATS處理的凝血酶，V max 和K m 同時發生變化，將直線交點不在橫坐標軸上和縱坐標軸上的情況判定為混合型抑制（或共同型抑制），說明該抑制作用屬于競爭性和非競爭性的共同型抑制。這意味兩種作用方式產生抑制：即與底物競爭酶結合部位方式以及與酶的非活性部位結合形成抑制物-酶復合物的方式，不影響酶與底物的再次結合。
4、大鼠體內實驗分析結果
凝血四項指標分析結果
如表1所示，與空白組相比，大蒜油、DAS、DADS、DATS處理組的PT、APTT和TT均出現顯著增高的趨勢，其中DATS組極顯著升高（P＜0.01），說明大蒜油、DAS、DADS、DATS均是通過改變內源性（APTT）、外源性（PT）、共同凝血途徑（TT）凝血系統而起到抗凝作用；大蒜油、DAS、DADS、DATS組FIB質量濃度極顯著下降，分別從（2.13±0.66）g/L降低至（1.48±0.23）、（1.54±0.48）、（1.31±0.35）、（1.16±0.13）g/L，說明大蒜油、DAS、DADS和DATS干預可以降低大鼠血液FIB含量從而發揮抗凝血活性。
抗氧化與抗凝血能力
如圖5所示，大蒜油、DAS、DADS、DATS處理組的GSH、GR、TP、T-AOC水平均比空白組略有升高，但都不具有顯著性差異（P＞0.05）。這說明大蒜油、DAS、DADS、DATS只有微弱的抗氧化能力，與大蒜油、DAS、DADS、DATS具有顯著抗凝血能力的結果并不一致。因此，本實驗所揭示的大蒜油、DAS、DADS、DATS抗凝血能力應該與其抗氧化能力無關。
結 論
本研究通過體內和體外實驗探索了大蒜油、DAS、DADS、DATS的抗凝血功能，紫外光譜、分子熒光光譜、動力學分析結果表明DAS、DADS、DATS對凝血酶的抑制作用屬于競爭性/非競爭的共同抑制效果；二維、三維分子對接分析結果表明抑制屬競爭性和非競爭抑制并存的作用方式；大鼠凝血四項的結果從體內的角度印證了大蒜油、DAS、DADS、DATS具有抗凝血功能；大鼠抗氧化實驗結果提示大蒜硫醚類抗凝血功能應與抗氧化能力不相關。
