科捷分享丨液相色譜柱安裝與使用說明
HPLC剖析是體系的作業(yè)，每個(gè)環(huán)節(jié)都很重要；看似簡略的環(huán)節(jié)，反而簡單疏忽，引起整個(gè)試驗(yàn)的成果偏差，因而養(yǎng)成杰出的習(xí)氣是很重要的。色譜柱是色譜體系的心臟，液相色譜柱的正確裝置與運(yùn)用，是色譜作業(yè)的要害；也是獲得正確牢靠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
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運(yùn)用儀器:??? LC-600A液相色譜儀
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一·液相色譜柱的裝置
1?????????液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a．空柱由柱接頭柱管及濾片拼裝而成
柱接頭選用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩頭螺紋組件，一端是為7/16英才外螺紋，另一端是3/16英才的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）。7/16英才外螺紋與1/4英寸柱管（￠6.35mm）銜接，中心放置壓環(huán)用于密封。3/16英才的內(nèi)螺紋與1/16英才（￠1.57mm）的銜接收銜接，之間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量削減柱外死體積，在裝置色譜柱時(shí)，用￠1.57mm銜接收經(jīng)過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后在擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘揉捏變形后緊箍在銜接收上（銜接收經(jīng)過壓環(huán)后顯露的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長或其他固定尺度。
在兩頭柱接頭內(nèi)，柱管兩頭各放置一片不銹鋼濾片（或?yàn)V網(wǎng)），用于封堵柱填料不被活動(dòng)相沖出柱外流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑效果。但含氯化物的溶劑對(duì)其有必定的腐蝕性，故運(yùn)用時(shí)要留意，柱及銜接收內(nèi)不能長期存留此類溶劑，以避免腐蝕。
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b．?柱填料：
液相色譜柱的別離效果是在填料和活動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為填料。依據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10um的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠外表鍵合—CN，—NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：首要是以硅膠為基質(zhì)，在其外表鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他反相填料還有鍵合C8，C4，C2，苯基等，其顆粒直徑在3-10um之間。
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2?????????色譜柱的裝置
a．?拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型，尺度，出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b．?擰下柱兩頭的密封堵頭放回包裝盒備用。
c．?按柱管上標(biāo)明的活動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端經(jīng)過銜接收與進(jìn)樣閥出口銜接（如條件允許，建議在柱前運(yùn)用維護(hù)柱）；柱的出口與檢測(cè)器銜接。銜接收是外徑為.57mm、內(nèi)徑為0.1mm-0.3mm的不銹鋼管。銜接收的兩頭均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接收時(shí)必定要設(shè)法下降柱外死體積。銜接收經(jīng)過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)停止，再用扳手持續(xù)順時(shí)針擰1/4-1/2圈，牢記不要用力太大。如色譜柱經(jīng)過活動(dòng)相加壓后有漏夜現(xiàn)象，請(qǐng)用扳手順時(shí)針擰1/4圈，直至不漏夜停止。
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二·液相色譜柱的運(yùn)用：
色譜柱在運(yùn)用前，進(jìn)行的柱的功用測(cè)驗(yàn)，并將成果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱功用變化的參考。但要留意：柱功用或許因?yàn)樗\(yùn)用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外做柱功用測(cè)驗(yàn)時(shí)是依照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)驗(yàn)所運(yùn)用的條件是*條件），只要這樣測(cè)驗(yàn)的成果才有可比性。
1?????????樣品的前處理：
a．?運(yùn)用活動(dòng)相溶解樣品。
b．?運(yùn)用預(yù)處理柱除掉樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料發(fā)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c．?運(yùn)用0.45um的過濾膜除掉微粒雜質(zhì)。
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2?????????活動(dòng)相的裝備：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交流而達(dá)到別離的意圖，因而要求活動(dòng)相具有以下的特色：
a．?活動(dòng)相對(duì)樣品具有必定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉積在柱中（或長期保留在柱中）。
b．?活動(dòng)相具有必定的惰性，與樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況在外）。
c．?活動(dòng)相的黏度要盡量的小，以便在運(yùn)用較長的剖析柱時(shí)能得到好的別離效果；同時(shí)下降柱壓降，延伸液壓泵的運(yùn)用壽命（可運(yùn)轉(zhuǎn)提高溫度的辦法下降活動(dòng)相的黏度）。
d．?活動(dòng)相的化學(xué)性質(zhì)要與運(yùn)用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如用UV檢測(cè)器，運(yùn)用對(duì)紫外吸收較低的溶劑制造。
e．?活動(dòng)相的沸點(diǎn)不要太低，擔(dān)任簡單發(fā)生氣泡，導(dǎo)致試驗(yàn)無法進(jìn)行。
f．???在活動(dòng)相裝備好后，必定進(jìn)行脫氣。除掉溶解在活動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以避免活動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生效果。
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3?????????活動(dòng)相流速的挑選：
因柱效是柱中活動(dòng)相線性流速的函數(shù)，運(yùn)用不同的流速可得到不同的柱效。關(guān)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，運(yùn)用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6 mm的色譜柱，流速一般挑選1ml/min，關(guān)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用*流速時(shí)，剖析時(shí)刻或許延伸。可選用改變活動(dòng)相的洗刷強(qiáng)度的辦法以縮短剖析時(shí)刻（如反相柱時(shí)，可適當(dāng)添加甲醇或乙腈的含量）。
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留意：
1）.因?yàn)榧状嫉牧畠r(jià)，關(guān)于反相柱推薦運(yùn)用甲醇體系（有必要運(yùn)用乙腈的在外）。
2）.關(guān)于正相柱推薦運(yùn)用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的乙烷做活動(dòng)相，沒有提純的乙烷不的運(yùn)用。用水運(yùn)用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有或許影響剖析的成果。
3）.含水活動(dòng)相在試驗(yàn)前制造，尤其是夏天運(yùn)用緩沖溶液作為活動(dòng)相不要過夜。加入*，避免細(xì)菌的生長。
4）.活動(dòng)相要求運(yùn)用0.45um濾膜過濾，除掉微粒雜質(zhì)。
5）.運(yùn)用HPLC級(jí)溶劑裝備活動(dòng)相，運(yùn)用合適的活動(dòng)相可延伸色譜柱的運(yùn)用壽命，提高柱功用。
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4????????柱功用的測(cè)驗(yàn)：
——啟動(dòng)液相色譜儀：a. 活動(dòng)相流速設(shè)定為1ml/min。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? b．UV檢測(cè)器波長設(shè)定為254nm。
——運(yùn)用出廠測(cè)驗(yàn)時(shí)運(yùn)用的活動(dòng)相組成及測(cè)驗(yàn)樣品。
——記錄并計(jì)算測(cè)驗(yàn)成果。
我公司業(yè)務(wù)范圍：
1、幫助您建立色譜剖析室及色譜剖析辦法、訓(xùn)練色譜操作人員.
2、銷售各類進(jìn)口、國產(chǎn)剖析儀器及有關(guān)配件、標(biāo)樣、試劑。
3、氣相色譜儀、液相色譜儀、紫外分光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)等各類剖析儀器的裝置調(diào)試、功用改善、維護(hù)修補(bǔ)。
4、對(duì)外承接樣品剖析檢測(cè)任務(wù)，給出性檢測(cè)報(bào)告。
