液相色譜柱的使用和注意事項(xiàng)
色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是最佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。 ?
??? 1、樣品的前處理；
??? a、最好使用流動(dòng)相溶解樣品；
??? b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；
??? c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
??? 2、流動(dòng)相的配制
??? 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
??? a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長期留在柱中）；
??? b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)；
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）；
??? d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制；
??? e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行；
??? f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
??? 3、流動(dòng)相流速的選擇
??? 因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
??? 當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。
??? 注意：
??? a.含水流動(dòng)相最好在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過夜。最好加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長；
??? b.流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)；
??? c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
